Na pesquisa imunológica de alta performance, a capacidade de monitorar a resposta imune celular ex vivo é fundamental para o desenvolvimento de vacinas, diagnóstico de doenças infecciosas e estudos de malignidades hematológicas. O ensaio ELISpot (Enzyme-Linked Immunospot) consolidou-se como a técnica de eleição para essa finalidade, permitindo a detecção de uma única célula secretora de citocinas em meio a milhares de células não secretoras.
O Papel da Interleucina 2 (IL-2) na Resposta Imune
A citocina Interleucina 2 (IL-2) é uma molécula reguladora pleiotrópica produzida principalmente por linfócitos T em resposta a estímulos antigênicos. Ela desempenha um papel central na prevenção de doenças autoimunes e na promoção da diferenciação celular. A quantificação exata da secreção de IL-2 é vital para entender como compostos imunomoduladores afetam a ativação linfocitária.
A Evolução para a Coloração por Prata
Tradicionalmente, os ensaios ELISpot utilizavam placas com membrana de PVDF opaca. No entanto, a inovação tecnológica introduziu o uso de placas de fundo transparente associadas a processos de coloração por prata. Esta mudança é tecnicamente superior porque:
- Visualização Dual: Permite o uso de microscopia de luz transmitida para identificar os "spots" e luz refletida para análises complementares.
- Estabilidade do Sinal: A precipitação de prata gera marcas permanentes e de alto contraste, ideais para o processamento via software de análise celular.
- Flexibilidade: Facilita a integração com a contagem automática de células no mesmo fluxo de trabalho.
Automação com Lionheart LX e Software Gen5
O maior gargalo do ELISpot manual é a subjetividade na contagem dos pontos. A utilização do microscópio automatizado Agilent BioTek Lionheart LX rompe essa barreira ao transformar a análise visual em dados quantitativos estatisticamente robustos. O sistema realiza a captura de imagens em todo o poço e, por meio do software Gen5, aplica algoritmos de segmentação para:
- Contagem de Spots: Identificação automática de cada evento secretor de IL-2.
- Métricas de Intensidade: Avaliação da massa de citocina produzida por poço (Spot Volume).
- Normalização de Dados: Essencial para garantir a reprodutibilidade em bioensaios complexos.
Padronização e Reprodutibilidade Analítica
Para assegurar resultados de nível de publicação, é imperativo que as etapas de lavagem das membranas sejam uniformes. A variação na remoção de detritos celulares é a causa número um de ruído de fundo elevado. Por isso, recomendamos o uso de lavadoras de microplacas de precisão antes da captura da imagem final.
Na Biosystems, atuamos desde 1990 fornecendo a instrumentação que permite a laboratórios de imunologia migrar de processos artesanais para a Microscopia Aumentada, garantindo que a ciência brasileira opere no estado da arte global.
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